پودر MTT صد میلی گرم

آزمون MTT (MTT Assay) چیست؟
MTT assay یک روش آزمایشگاهی رایج برای اندازه‌گیری زنده‌مانی (Viability)، تکثیر (Proliferation) و سمیت سلولی (Cytotoxicity) است. این تست بیشتر در کشت سلول، تحقیقات سرطان، داروسازی و بررسی اثر داروها استفاده می‌شود.
نام MTT از ماده‌ای به نام:
3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide
گرفته شده است.
اساس کار MTT
اصل آزمایش بر پایه فعالیت میتوکندری سلول‌های زنده است.
سلول‌های زنده دارای آنزیم‌هایی (خصوصاً آنزیم‌های دهیدروژناز میتوکندریایی) هستند که می‌توانند:
MTT زرد رنگ → Formazan بنفش رنگ
تبدیل کنند.
یعنی:
سلول زنده → فعالیت متابولیکی دارد → کریستال بنفش Formazan تولید می‌کند
سلول مرده → فعالیت متابولیکی ندارد → رنگ تولید نمی‌شود
هرچه رنگ بنفش بیشتر باشد، معمولاً تعداد سلول‌های زنده بیشتر است.
مراحل کلی انجام MTT Assay
1. کشت سلول
سلول‌ها در پلیت (معمولاً 96 خانه‌ای) کشت داده می‌شوند.
2. تیمار سلول‌ها
دارو، ماده شیمیایی، عصاره گیاهی یا ترکیب مورد آزمایش اضافه می‌شود.
مثلاً:
داروی ضدسرطان
نانوذره
سم
ترکیب جدید دارویی
3. اضافه کردن محلول MTT
محلول MTT به چاهک‌ها اضافه می‌شود.
معمولاً:
غلظت حدود 0.5 mg/mL
چند ساعت انکوباسیون
4. تشکیل کریستال Formazan
سلول‌های زنده کریستال‌های بنفش ایجاد می‌کنند.
5. حل کردن کریستال‌ها
با موادی مثل:
DMSO
Isopropanol اسیدی
کریستال‌ها حل می‌شوند.
6. خواندن جذب نوری
با دستگاه Microplate Reader جذب در حدود:
570 nm
خوانده می‌شود.
تفسیر نتایج
مثلاً:
کنترل بدون دارو:
جذب = 1.0
نمونه دارویی:
جذب = 0.4
یعنی حدوداً:
40٪ سلول‌ها زنده مانده‌اند.
فرمول رایج:
Cell Viability(%)=Absorbance SampleAbsorbance Control×100Cell\ Viability(\%)= \frac{Absorbance\ Sample}{Absorbance\ Control} \times100Cell Viability(%)=Absorbance ControlAbsorbance Sample​×100
کاربردهای MTT
1. تحقیقات سرطان
برای بررسی اینکه یک دارو چقدر سلول سرطانی را می‌کشد.
مثلاً:
بررسی اثر داروی شیمی‌درمانی روی سلول سرطان پستان
2. تست سمیت مواد
بررسی سمیت:
نانوذرات
مواد آرایشی
مواد شیمیایی
3. بررسی رشد سلولی
اندازه‌گیری:
تکثیر سلول
اثر فاکتورهای رشد
4. تحقیقات دارویی
محاسبه:
IC50
IC50 در MTT چیست؟
IC50 غلظتی از یک ماده است که باعث کاهش 50 درصدی زنده‌مانی سلول‌ها می‌شود.
مثلاً:
دارویی با IC50 = 10 µM
یعنی در غلظت 10 میکرومولار، حدود نیمی از سلول‌ها تحت تأثیر قرار گرفته‌اند.

مزایای MTT
ارزان و ساده
نیاز به تجهیزات پیچیده ندارد
مناسب برای تعداد زیادی نمونه
روش استاندارد در مقالات علمی

معایب MTT
مستقیماً تعداد سلول را اندازه نمی‌گیرد، بلکه فعالیت متابولیکی را می‌سنجد
بعضی مواد ممکن است با MTT واکنش دهند
زمان‌بر است
سلول‌های مرده ممکن است نتایج را کمی تغییر دهند

تست‌های مشابه MTT
تستویژگیMTTروش کلاسیک و رایجMTSمحلول‌تر، بدون نیاز به حل کردن کریستالXTTحساسیت بالاترWST-1سریع‌تر و ساده‌ترResazurin (Alamar Blue)غیرکشنده برای سلول
تجهیزات مورد نیاز
برای انجام MTT معمولاً نیاز است:
هود لامینار
انکوباتور CO₂
میکروسکوپ معکوس
میکروپلیت 96 خانه‌ای
میکروپیپت
محلول MTT
DMSO
Microplate Reader